常见三种色谱法的特点及应用

    色谱作为一种分离技术与方法，自20世纪40年代以后，逐渐得到发展，而且其势头越来越猛，从技术到理论，再到各种分离模式，以及在生物学、医学、药物临床、化学化工、食品安全、环境监测、商品检验、法医检验等领域都有广泛的应用，现已成为分析化学学科中的一个重要分支，对科学的进步和生产的发展起着重要的作用。各种色谱仪器已成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。

   经常会用到的色谱法主要有五种：柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和超临界流体色谱法。本文主要介绍前三种。

一、柱色谱法

    是最原始的色谱方法。

    该方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。

    常见的洗脱方式有两种：一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，另一种：自下而上依靠毛细作用洗脱。

    收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法：一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。

    柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括：对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。

二、薄层色谱法（TIC）

    是应用非常广泛的色谱方法。

    这种色谱方法将固定相涂布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。

    薄层色谱法成本低廉、操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。

三、高效液相色谱法（HPLC）

    是目前应用最多的色谱分析方法。

    高效液相色谱系统由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是，针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC输液泵要求输液量稳定平衡；进样系统要求进样便利、切换严密；由于液体流动相黏度远远小于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。

    HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。高效液相色谱法依据溶质（样品）在固定相和流动相中分离过程的物理化学原理可以分为以下几种：

①吸附色谱：用固定吸附剂做固定相，以不同极性溶剂做流动相，依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。

②分配色谱

③亲水作用色谱

④疏水作用色谱

⑤离子色谱

⑥体积排阻色谱

⑦亲和色谱