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HPLC法测定维生素C口含片中维生素C含量的整体方案

点击: 次 时间:2018-12-04 17:07

方案概述

维生素C口含片属维生素类药,用于体内需大量补充维生素C时。

质量标准(国家食品药品监督管理局颁布,标准号WS1-(X-092)-2004Z)中规定用滴定法(碘量法)测定维生素C的含量,该法操作繁琐,影响因素较多,特别是专属性较差。

本文通过试验,建立了HPLC法测定该制剂中维生素C的含量。采用高效液相色谱法,准确、灵敏、重现性好,可作为维生素C口含片中维生素C含量测定的方法,以控制药品质量。

一、仪器与试药

高效液相色谱仪,包括泵、检测器、色谱工作站;

维生素C对照品(中国药品生物制品检定所,批号100425-200301 ) ;

维生素C口含片(协和药业有限公司,规格0.5g/片,每片含维生素C500mg,批号040301) ;

甲醇 (色谱纯);

其余试剂均为分析纯。

二、实验方法

2.1色谱条件

色谱柱 : Inertsil ODS - 3, 4. 6×250mm ( GL SciencesInc);

流动相 :己烷磺酸钠溶液 (取 0. 94g己烷磺酸钠,置1 000mL量瓶中 ,加冰醋酸 10mL ,加水稀释至刻度 ,摇匀 )

-甲醇 ( 6∶ , pH = 3. 1;流速 : 0. 8mL /m in;柱温 :室温;检测波长 : 245nm;进样量 10μL。理论板数按维生素 C峰计算不低于 3 000。

2.2 测定波长的选择

取维生素 C对照品适量 ,加甲醇稀释成 0. 05mg /mL的溶液 ,在 200~400nm波长扫描,结果在 245nm波长处有最大吸收。故以 245nm为检测波长。

2.3对照品溶液的配制

精密称取维生素 C对照品 0. 025 0g,置 50mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀 ,精密量取 10mL ,置 100mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀 ,即得对照品溶液。

2.4供试品溶液的配制

取维生素 C口含片 ,研细 ,精密称取适量 (约相当于维生素 C 0. 025g) ,置 50mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀 ,精密量取 10mL ,置 100mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀 ,滤过 ,即得供试品溶液。

2.5标准曲线的绘制

精密称取维生素C对照品0.0250g,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密量取适量,加甲醇稀释成0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.0375mg/mL、0.05mg/mL、0.0625mg/mL、0.075mg/mL、0.0875mg/mL的对照品溶液。进样量为10μL。

以进样量X(μg)为横坐标,峰面积Y为纵坐标,得回归方程:Y=272850X+22636,r=0.9999。结果表明,

维生素C在0.125~0.875μg之间呈现良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密量取对照品溶液10μL,连续进样5次,测定峰面积值。结果峰面积相对标准偏差RSD为0.17% ,表明本法精密度良好。

2.7稳定性试验

取同一份供试品溶液,分别于0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h进样10μL,记录色谱图。结果相对标准偏差RSD为0.24% ,说明供试品溶液在 3h内基本稳定。

2.8重现性试验

取维生素C口含片样品6份,分别按供试品溶液制备的方法操作,按上述的色谱条件测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算维生素C含量。结果相对标准偏差RSD为0.26%,表明本方法有良好的重现性。

2.9空白试验

按处方比例和工艺,制备不含维生素C的空白样品,按样品测定方法制备,得空白溶液。通过进样分析试验可知,维生素C口含片中其他成分对测定无干扰。

2.10加样回收率试验

精密称取已知含量的维生素C口含片样品6份,样品量约为供试品溶液制备方法的一半量,精密加入维生素C对照品,分别按上述供试品溶液制备的方法操作 ,按上述拟定的色谱条件测定 ,记录色谱图,并计算加样回收率。结果表明,x为99.65%,RSD为0.38%。

2.11样品测定

按上述方法测定维生素C口含片的含量,并与WS1-(X-092)-2004Z的方法进行比较,共测定5份。结果见下表:

 

2.12 维生素C的检出限和定量限

经对维生素C对照品溶液逐步进行稀释,进样,得测定维生素C的检出限为1.5*10-3μg(信噪比为3:1),定量限为5.0*10-3μg(信噪比为10:1)。

三、结论

维生素C在空气中极不稳定,配制的溶液不宜久置,实验时应新鲜配制,以减少氧化。

利用HPLC法测定维生素C口含片中维生素C的含量,与滴定法相比,HPLC法更趋于灵敏、准确、重现性好,可作为该制剂中维生素C的含量控制方法。



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